Tá einsímí ann a dhéanann venom nathair a hidrealaíonn bannaí eistear carbocsail.Is iad na foshraitheanna le haghaidh hidrealú fosfailipidí, acetylcholine agus aicéatáit aramatacha.Áirítear ar na heinsímí trí chineál: fospholipase, acetylcholinesterase agus esterase aramatacha.Is féidir le arginine esterase i venom nathair freisin arginine sintéiseach nó lísín a hidrealú, ach go príomha hidrealaíonn sé bannaí peptide próitéine sa nádúr, agus mar sin baineann sé le protease.Ní fheidhmíonn na heinsímí a phléitear anseo ach ar fhoshraitheanna eistir agus ní féidir leo gníomhú ar aon nasc peiptíde.I measc na n-einsímí seo, tá feidhmeanna bitheolaíocha acetylcholinesterase agus phospholipase níos tábhachtaí agus rinneadh staidéar iomlán orthu.Tá gníomhaíocht láidir eistiráis aramatach ag roinnt venoms nathair, ar féidir leo eistear p-nitrophenyl eitile, a - nó aicéatáit P-naftailéin agus eistear eitile indole a hidrealú.Ní fios fós an bhfuil an ghníomhaíocht seo á dtáirgeadh ag einsím neamhspleách nó ag fo-iarmhairt aitheanta carboxylesterase, gan trácht ar a thábhacht bhitheolaíoch.Nuair a imoibríodh venom Agkistrodon halys Japonicus le p-nitrophenyl eitile agus eistear indole eitile, níor aimsíodh hidrealáití p-nitrophenol agus feanól indole;Os a choinne sin, má imoibríonn na heistir seo le venom nathair fospeicis cobra Zhoushan agus venom nathair Bungarus multicinctus, déanfar iad a hidrealú go tapa.Tá sé ar eolas go bhfuil gníomhaíocht láidir cholinesterase ag na venoms cobra seo, a d'fhéadfadh a bheith freagrach as hidrealú na bhfoshraitheanna thuas.Go deimhin, tá Mclean et al.(1971) gur féidir le go leor venoms nathair a bhaineann leis an teaghlach Cobra eistear eitile indole, eistear naftailéin eitile agus eistear naftailéin bhúitile a hidrealú.Tagann na venoms nathair seo ó: cobra, cobra dubh necked, cobra lipped dubh, cobra órga, cobra hÉigipte, cobra rí, cobra mamba órga, mamba dubh agus bán lipped mamba (D. aw fós ar an eolas faoi thoircheach rhombola nathracha rattlesnake
Is féidir leis an venom nathair eistear eitile indole meitile a hidrealú, arb é an tsubstráit chun gníomhaíocht cholinesterase i serum a chinneadh, ach ní léiríonn an venom nathair seo gníomhaíocht cholinesterase.Léiríonn sé seo go bhfuil esterase anaithnid i venom cobra, atá difriúil ó cholinesterase.Chun nádúr na heinsíme seo a thuiscint, tá gá le tuilleadh oibre idirscartha.
1, Fospholipáis A2
(I) Forbhreathnú
Is einsím é fosfailipáis a fhéadfaidh fosfáit gliocróile a hidrealú.Tá 5 chineál fosfailipáis sa nádúr, is iad sin fospholipase A2 agus fospholipase
A. , fospholipase B, fospholipase C agus fospholipase D. Is éard atá sa venom nathair go príomha fospholipase A2 (PLA2), tá fospholipase B i roinnt venoms nathair, agus tá fospholipase B le fáil go príomha i bhfíocháin ainmhithe agus baictéir.Taispeánann Fíor 3-11-4 suíomh gníomhaíochta na bhfospholipáis seo ar hidrealú an tsubstráit.
I measc fospholipáis, tá níos mó staidéar déanta ar PLA2.B’fhéidir gurb í an einsím is mó a ndéantar staidéar uirthi i ngéineach nathair.Is é an tsubstráit an banna eistir ar an dara suíomh Sn-3-glycerophosphate.Tá an einsím seo le fáil go forleathan i venom nathair, venom beacha, venom scairp agus fíocháin ainmhithe, agus tá PLA2 flúirseach i gceithre venom nathair teaghlaigh.Toisc go mbriseann an einsím seo cealla fola dearga agus go n-eascraíonn sé haemolysis, tugtar “hemolysin” air freisin.Glaonn roinnt daoine freisin PLA2 lecithinase hemolytic.
Fuair Ludeeke amach ar dtús gur féidir le venom nathair comhdhúil hemolytic a tháirgeadh trí ghníomhú ar lecithin trí einsímí.Níos déanaí, Delezenne et al.cruthaithe nuair a ghníomhaíonn venom cobra ar serum capall nó buíocán, foirmíonn sé substaint hemolytic.Tá a fhios anois gur féidir le PLA2 gníomhú go díreach ar fhospholipidí an membrane erythrocyte, ag scriosadh struchtúr an membrane erythrocyte agus ag cruthú hemolysis díreach;Féadfaidh sé gníomhú freisin ar serum nó lecithin breise chun lecithin hemolytic a tháirgeadh, a ghníomhaíonn ar chealla fola dearga chun hemolysis indíreach a tháirgeadh.Cé go bhfuil PLA2 flúirseach sna ceithre theaghlach venoms nathair, tá an t-ábhar na n-einsímí i venoms nathair éagsúla beagán difriúil.nathracha (C
Níor léirigh venom nathair ach gníomhaíocht PLA2 lag.Léiríonn Tábla 3-11-11 an chomparáid idir ghníomhaíocht PLA2 de 10 ngéibheann móra de nathracha nimhiúla sa tSín.
Tábla 3-11-11 Comparáid idir gníomhaíochtaí fosfailipáis VIII de 10 venom nathair sa tSín
venom nathair
Scaoileadh saill
Aigéad alfatach,
Cjumol/mg)
Gníomhaíocht hemolytic CHU50 / ^ g * ml)
venom nathair
Aigéid sailleacha scaoileadh
(^ raol/mg)
Gníomhaíocht hemolytic “(HU50/ftg * 1111)
Najanaja atra
9. 62
a haon déag
Oifis miocrail
cúig phointe a haon náid
cailíspallas
8. 68
dhá mhíle agus ocht gcéad
gracilis
V, acutus
7. 56
* * #
Ophiophagus hannah
trí phointe ocht a dó
céad is daichead
Fasctatus Bnugarus
7,56
dhá chéad ochtó
B. ilchonctus
pointe amháin naoi sé
dhá chéad ochtó
Viper agus russelli
seacht bpointe náid a trí
T, mucrosquamatus
aon phointe a hocht a cúig
Siamensis
T. stejnegeri
0. 97
（2） Scaradh agus íonú
Tá ábhar PLA2 i venom nathair mór, agus tá sé cobhsaí le teas, aigéad, alcaile agus dínádúraithe, ionas go mbeidh sé éasca PLA2 a íonú agus a scaradh.Is é an modh coitianta ná scagachán glóthach a dhéanamh ar an venom amh ar dtús, ansin crómatagrafaíocht malairte ian a dhéanamh, agus is féidir an chéad chéim eile a dhéanamh arís.Ba chóir a thabhairt faoi deara nár cheart go dtiocfadh comhiomlánú ar reo-thriomú PLA2 tar éis crómatagrafaíocht ian-mhalartaithe, toisc go n-ardóidh an próiseas reoite-thriomú go minic an neart ianach sa chóras, rud atá ina fhachtóir tábhachtach is cúis le comhiomlánú PLA2.Chomh maith leis na modhanna ginearálta thuas, glacadh leis na modhanna seo a leanas freisin: ① Wells et al.② Baineadh úsáid as an tsubstráit analógach de PLA2 mar ligand do chromatagrafaíocht cleamhnais.Is féidir leis an ligand seo ceangal le PLA2 i venom nathair le Ca2+.Úsáidtear EDTA mar eluent den chuid is mó.Tar éis Ca2+ a bhaint, laghdaítear an cleamhnas idir PLA2 agus ligand, agus is féidir é a dhícheangal ón ligand.Úsáideann daoine eile tuaslagán orgánach 30% nó 6mol/L úiré mar eluent.③ Rinneadh crómatagrafaíocht hidreafóbach le PheiiylSephar0SeCL-4B chun rian PLA2 a bhaint as cairdeatocsain.④ Baineadh úsáid as antashubstaint Frith PLA2 mar ligand chun crómatagrafaíocht cleamhnais a dhéanamh ar PLA2.
Go dtí seo, tá líon mór venom nathair PLAZ íonaithe.Tu et al.(1977) liostaithe PLA2 íonaithe ó venom nathair roimh 1975. Le blianta beaga anuas, tuairiscíodh líon mór alt faoi scaradh agus íonú PLA2 gach bliain.Anseo, dírímid ar scaradh agus íonú PLA ag scoláirí na Síne.
Chen Yuancong et al.(1981) scartha trí speiceas PLA2 ó venom Agkistrodon halys Pallas i Zhejiang, ar féidir iad a roinnt ina PLA2 aigéadach, neodrach agus alcaileach de réir a bpointí isoelectric.De réir a thocsaineachta, tá PLA2 neodrach níos tocsaineach, a aithníodh mar neurotoxin presynaptic Agkistrodotoxin.Tá PLA2 alcaileach níos lú tocsaineach, agus níl beagnach aon tocsaineacht ag PLA2 aigéadach.Tá Wu Xiangfu et al.(1984) i gcomparáid le saintréithe trí PLA2, lena n-áirítear meáchan móilíneach, comhdhéanamh aimínaigéad, N-críochfort, pointe isoelectric, cobhsaíocht theirmeach, gníomhaíocht einsímeach, tocsaineacht agus gníomhaíocht hemolytic.Léirigh na torthaí go raibh meáchan móilíneach den chineál céanna agus cobhsaíocht theirmeach acu, ach bhí difríochtaí suntasacha acu i ngnéithe eile.I ngné na gníomhaíochta einsíme, bhí gníomhaíocht einsím aigéad níos airde ná gníomhaíocht einsím alcaileach;Ba í an éifeacht hemolytic na heinsíme alcaileach ar cealla fola dearga francach an ceann is láidre, le leanúint ag einsím neodrach, agus einsím aigéad hemolyzed ar éigean.Dá bhrí sin, tá sé speculated go bhfuil an éifeacht hemolytic de PLAZ a bhaineann le muirear de PLA2 móilín.Dúirt Zhang Jingkang et al.(1981) criostail Agkistrodotoxin déanta acu.Tá Tu Guangliang et al.(1983) go ndearnadh PLA tocsaineach le pointe isoelectric de 7. 6 a leithlisiú agus a íonú ó venom Vipera rotundus ó Fujian, agus a chuid airíonna fisiceacha agus ceimiceacha, comhdhéanamh aimínaigéad agus seicheamh 22 iarmhair aimínaigéad ag an N. -cinneadh críochfort.Dúirt Li Yuesheng et al.(1985) aonrú agus íonú PLA2 eile ó venom Viper rotundus i Fujian.Is é fo-aonad an PLA2 * 13 800, is é an pointe isoelectric 10.4, agus is é 35/xnioI/miri mg an ghníomhaíocht shonrach. LD5 instealladh infhéitheach i lucha.Tá sé 0.5 ± 0.12mg/kg.Tá éifeachtaí soiléire anticoagulant agus hemolytic ag an einsím seo.Tá an móilín tocsaineach PLA2 comhdhéanta de 123 iarmhar de 18 cineál aimínaigéid.Tá an móilín saibhir i cistéin (14), aigéad aspartic (14) agus glicín (12), ach níl ach meitiainín amháin ann, agus is é an críochfort N ná iarmhar serine.I gcomparáid le PLA2 scoite ag Tuguang, tá an meáchan móilíneach agus líon na n-iarmhar aimínaigéad den dá isoenzymes an-chosúil, agus tá comhdhéanamh aimínaigéad an-chosúil freisin, ach tá líon na n-aigéad aspartic agus iarmhair proline beagán difriúil.Guangxi rí cobra venom nathair Tá PLA2 saibhir.Shu Yuyan et al.(1989) scoite amach PLA2 ón venom, a bhfuil gníomhaíocht shonrach 3.6 huaire níos airde ná an venom bunaidh, meáchan móilíneach de 13000, comhdhéanamh de 122 iarmhair aimínaigéad, pointe isoelectric de 8.9, agus cobhsaíocht theirmeach maith.Ón breathnóireacht micreascóp leictreon ar éifeacht PLA2 bunúsach ar chealla fola dearga, is féidir a fheiceáil go bhfuil éifeacht soiléir aige ar membrane cille fola dearga daonna, ach níl aon éifeacht soiléir aige ar chealla fola dearga gabhar.Tá éifeacht mhoillithe soiléir ag an PLA2 seo ar luas leictreafóiriteach na gcealla fola dearga i ndaoine, i ngabhar, i gcoiníní agus i muca guine.Chen et al.Is féidir leis an einsím seo comhiomlánú pláitíní a chosc a tharlódh ADP, collaigine agus aigéad arachidónach sóidiam.Nuair a bhíonn tiúchan PLA2 10/xg/ml~lOOjug/ml, cuirtear bac iomlán ar chomhiomlánú pláitíní.Dá n-úsáidfí pláitíní nite mar ábhair, ní fhéadfadh PLA2 bac a chur ar chomhiomlánú ag tiúchan 20Mg/ml.Is inhibitor de cyclooxygenase aspirin, is féidir a bac ar éifeacht PLA2 ar pláitíní.Féadfaidh PLA2 comhiomlánú pláitíní a chosc trí aigéad arachidónach a hidrealú chun thromboxane A2 a shintéisiú.Rinneadh staidéar ar chomhfhoirmiú réitigh PLA2 a tháirgtear ag Agkistrodon halys Pallas venom i gCúige Zhejiang trí dichroism ciorclach, fluaraiseacht agus ionsú UV.Léirigh na torthaí turgnamhacha go raibh príomh-chomhfhoirmiú slabhra an einsím seo cosúil leis an gcineál céanna einsím ó speicis agus géineas eile, bhí friotaíocht teasa maith ag an gcomhfhoirmiú cnámharlaigh, agus bhí an t-athrú struchtúrach ar thimpeallacht aigéad inchúlaithe.Ní chuireann an teaglaim de ghníomhachtú Ca2+ agus einsím isteach ar thimpeallacht na n-iarmhar tryptophan, agus déanann an t-inchomhshóite Zn2+ a mhalairt.Tá an chaoi a dtéann luach pH an tuaslagáin i bhfeidhm ar ghníomhaíocht einsíme difriúil ó na himoibrithe thuas.
I bpróiseas íonú PLA2 ar venom nathair, is feiniméan soiléir é go bhfuil dhá bhuaic elution PLA2 nó níos mó ag venom nathair.Is féidir an feiniméan seo a mhíniú mar seo a leanas: ① mar gheall ar isaiméisí a bheith ann;② Déantar cineál amháin PLA2 a pholaiméiriú i meascáin éagsúla PLA2 le meáchain mhóilíneacha éagsúla, agus tá an chuid is mó acu sa raon 9 000 ~ 40 000;③ Déanann an meascán de PLA2 agus comhpháirteanna venom nathair eile casta ar PLA2;④ Toisc go bhfuil an banna aimíde i PLA2 hidrealú, athraíonn an muirear.① Agus tá ② coitianta, gan ach cúpla eisceacht, mar PLA2 i venom nathair CrWa/w
Tá dhá chás ann: ① agus ②.Tá an tríú coinníoll le fáil i PLA2 i ngéibheann na nathracha seo a leanas: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a^>er, víobaire Palaistíneacha, viper gainimh, agus km nathracha uafásacha.
Mar thoradh ar chás ④ athraíonn luas imirce PLA2 le linn leictreafóiréis, ach ní athraíonn an comhdhéanamh aimínaigéad.Is féidir peptides a bhriseadh trí hidrealú, ach go ginearálta tá siad fós ceangailte le chéile ag bannaí déshilfíde.Tá dhá chineál PLA2 i ngéibheann an locha thoir, ar a dtugtar cineál a agus cineál p PLA2 faoi seach.Níl an difríocht idir an dá chineál seo de PLA2 ach aimínaigéad amháin, is é sin, tá aigéad glútamach in ionad glutamine i móilín PLA2 amháin sa mhóilín PLA2 eile.Cé nach bhfuil an chúis chruinn leis an difríocht seo soiléir, creidtear go ginearálta go bhfuil baint aige le dímhilliú PLA2.Má choinnítear PLA2 sa venom nathair Palaistíne te leis an ngoinín amh, éireoidh na grúpaí deiridh ina móilíní einsíme níos mó ná mar a bhí roimhe seo.Ó C PLA2 scoite ó venom nathair tá dhá N-críochfort éagsúla, agus is é a meáchan móilíneach 30000. D'fhéadfadh an feiniméan seo a bheith ba chúis leis an dimer neamhshiméadrach de PLA2, atá cosúil leis an dimer siméadrach déanta ag PLA2 i venom an oirthear diamondback rattlesnake agus nathracha droma diamaint thiar.Tá cobra na hÁise comhdhéanta de go leor fospeicis, cuid acu nach bhfuil an-cinnte maidir le haicmiú.Mar shampla, aithnítear anois an rud a dtugtaí an fospeicis Cobra Seachtrach Chaisp air
Ba cheart é a chur i leith Cobra Mhuir Chaisp Amuigh.Toisc go bhfuil go leor fospeicis ann agus go bhfuil siad measctha le chéile, athraíonn comhdhéanamh venom nathair go mór mar gheall ar fhoinsí éagsúla, agus tá ábhar isoimimí PLA2 ard freisin.Mar shampla, venom cobra
Fuarthas ar a laghad 9 gcineál isiméimí PLA2 de speicis r^ll, agus fuarthas 7 gcineál isimiméad PLA2 i ngéibheann an fhospeicis cobra Chaisp.Dúirt Durkin et al.(1981) rinne sé staidéar ar ábhar PLA2 agus ar líon na n-isiméisí i venoms nathracha éagsúla, lena n-áirítear 18 venom cobra, 3 venom mamba, 5 venom vipe, 16 venom nathracha agus 3 venom nathracha farraige.Go ginearálta, tá gníomhaíocht PLA2 venom cobra ard, le go leor isoimimeanna.Is meánmhéide iad gníomhaíocht PLA2 agus isiméimí na n-ainmhithe vibe.Tá gníomhaíocht PLA2 venom mamba agus venom nathracha an-íseal nó gan aon ghníomhaíocht PLA2.Tá gníomhaíocht PLA2 venom nathair farraige íseal freisin.
Le blianta beaga anuas, níor tuairiscíodh go bhfuil PLA2 i venom nathair ann i bhfoirm dimer gníomhach, mar an rattlesnake rhombophora thoir (C. venom nathair tá cineál a agus cineál P PLA2, an dá cheann comhdhéanta de dhá fho-aonad comhionann. , agus níl ach dimerase
Gníomhaíocht.Shen et al.molta freisin nach bhfuil ach an dimer de PLA2 de na venom nathair an fhoirm ghníomhach na heinsíme.Cruthaíonn an staidéar ar struchtúr spásúil freisin go bhfuil PLA2 de nathracha droma diamaint thiar i bhfoirm dimer.Comhdhúil piscivorous
Tá dhá PLA^ Ei agus E2 dhifriúla de venom nathair ann, ina bhfuil 仏 ann i bhfoirm dimer, tá an dimer gníomhach, agus tá a monaiméir dícheangailte neamhghníomhach.Lu Yinghua et al.(1980) staidéar breise ar airíonna fisiceacha agus ceimiceacha agus ar chinéitic imoibrithe E. Jayanthi et al.(1989) aon PLA2 bunúsach (VRVPL-V) a leithlisiú ón venom viper.Is é meáchan móilíneach an monaiméir PLA2 ná 10000, a bhfuil éifeachtaí marfach, anticoagulant agus éidéime aige.Is féidir leis an einsím polaiméiriú a dhéanamh ar pholaiméirí le meáchain mhóilíneacha éagsúla faoi choinníoll PH 4.8, agus méadaítear méid polaiméirithe agus meáchan móilíneach na polaiméirí le méadú teochta.Is é meáchan móilíneach an pholaiméir a ghintear ag 96 ° C ná 53 100, agus méadaíonn gníomhaíocht PLA2 an pholaiméir seo dhá cheann
Am postála: Samhain-18-2022